产品货号:
BTN90403
中文名称:
蛋白胶中量回收试剂盒
英文名称:
Midi Protein Gel Extraction Kit
产品规格:
5T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品用于凝胶蛋白的中量回收,适用于变性PAGE胶(如SDS-PAGE)和非变性PAGE胶。
保存:室温,有效期1年。
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- 简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
- 每次可以处理1g的PAGE胶(具体含多少蛋白质取决于上样的浓度)。
- 回收率一般在50~90%之间(跟蛋白质亲水性、大小、洗脱时间相关)。
- 跟后续的实验兼容,包括2-D电泳、质谱测序、EMSA或其它活性检测实验等。
组分 | 规格 |
蛋白胶中量纯化溶液A | 5mL |
蛋白胶中量纯化溶液B | 50mL |
20mL塑料注射器 | 5只 |
保存:室温,有效期1年。
- 按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性PAGE蛋白电泳。
- 切取含目的蛋白条带的PAGE胶。
- 尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率。
- PAGE胶固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
- 尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率。
- 将切下的、重量不超过1克的胶块转移到20mL塑料注射器中(不安装针头)。用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去,使之变成细小的碎片,用自备的15mL塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。也可用其他方法捣碎PAGE胶条,包括液氮研磨。胶条越碎,蛋白回收率越高。
- 加入1mL蛋白胶中量纯化溶液A,4℃脱色摇床上摇晃洗脱至少16小时(过夜)。此期间最好将蛋白胶中量纯化溶液B放在-20℃冰箱预冷待用。
- 10000g离心10分钟,转移上清(含回收蛋白)到新的10~15mL的塑料离心管中。
- 不要吸取PAGE胶碎片。
- 加入5倍体积的预冷的蛋白胶中量纯化溶液B,摇晃混匀。
- -20℃放置至少30分钟。
- 室温12000g离心20分钟,小心弃上清,不要吸走沉淀。
- 一定要检查使用的离心管是否能够耐受此离心力,如果不能建议将溶液分到1.5mL的塑料离心管中再在台式离心机上进行离心处理。
- 室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在跟后续测试兼容的缓冲液中,直接用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。
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